Nicholas Brendon nasce a Los Angeles (California) il 12 Aprile del 1971, esattamente tre minuti dopo il suo gemello, l'attore Kelly Donovan. Alla Chatsworth High School Nicholas eccelle nel baseball, ma ha difficoltà con lo studio dovute a una forma di balbuzie. Il suo sogno è di giocare per i Dodgers, una delle più famose squadre di baseball, ma purtroppo deve rinunciare a causa di un infortunio al braccio occorsogli a un anno dal diploma. Per superare il problema della balbuzie, Nicholas decide di darsi alla recitazione, ma dopo due anni rinuncia perché "non sopporta le regole politiche di Hollywood". Decide di iscriversi al Pasadena City College, alla facoltà di medicina, ma dopo poco rinuncia. Ha provato una varietà di altri lavori, incluso l'idraulico, il cameriere, l'assistente produttore e il custode in un ambulatorio veterinario.
Nicholas ritenta di nuovo con il cinema e comincia a fare audizioni; dopo solo due mesi si reca al provino per il personaggio di una serie tv. Ottiene la parte e la sua carriera comincia a decollare con il ruolo dell'impacciato e tenero Xander Harris nella famosa serie Buffy l'Ammazzavampiri (1997). Lo show continua a mietere successi fino al 2003, regalando a Nicholas una nutrita schiera di fan che continuano a seguire i suoi progressi. Il suo gemello, Kelly, ha interpretato insieme al fratello l'episodio "the Replacement", nel quale Xander si sdoppia in due entità distinte. Nel 2000 Nick ha interpretato Starcat nel film Psycho Beach Party, una satira diretta da Charles Busch e nel 2004 è stato diretto da Larry Shaw nel film tv Celeste in the city. L'attore ha esordito anche a teatro in varie produzioni: "The Further Adventures of Tom Sawyer" al Theater West, "My Own private Hollywood" al Black Hole Theater, "Out of gas on lover's leap" al Pasadena Playhouse.
Fuori dal set, Nicholas fa parte dell'Associazione Balbuzienti d'America e partecipa attivamente alle campagne informative, spesso prestando la sua immagine per le promozioni dell'associazione. È stato il primo membro a ricoprire il ruolo di portavoce per tre anni di seguito. Nonostante abbia dovuto rinunciare alla carriera professionistica come giocatore, Nick ama ancora giocare a baseball e tra i suoi hobby troviamo il campeggio e il basket. Fino a qualche tempo fa viveva insieme al fratello gemello, che spesso i fans scambiano per Nicholas. Il primo settembre del 2001 si è sposato con l'attrice Tressa DiFiglia.
Nel 2005 ha partecipato a una convention di Buffy a Cleveland, dove ha annunciato che si è iscritto a un programma di riabilitazione per un problema di alcolismo. Sempre nel 2005 è entrato a far parte del cast della nuova sit-com della Fox Kitchen Confidential, serie basata sul libro dello chef Antony Bourdain. Tuttavia, il basso numero degli ascolti ha segnato la fine prematura dello show dopo sole 13 puntate.
In seguito l'attore ha presentato la sua voce nella serie animata American Dragon: Jake Long e ha partecipato alla commedia teatrale Lobster Alice insieme a Noha Wyle. Ha recitato nel film della ABC Family Chaos, dove si è riunito a Charisma Carpenter, ex collega sul set di Buffy.
Più di recente l'attore è comparso in alcuni episodi della serie tv Criminal Minds, nel ruolo dell'analista Kevin Lynch, Senza traccia, nella parte di Edgar, e Private Practice, nel ruolo di un individuo mentalmente instabile che aggredisce Charlotte King. Al cinema, invece, ha preso parte solo a piccole produzioni e film tv, non distribuite in Italia, come The Portal, A Golden Christmas e My Neighbor's Secret. Nicholas ha anche continuato a cimentarsi in spettacoli teatrali (tra cui "The Santaland Diaries" e "Why Torture Is Wrong, And The People Who Love Them") e nel 2010 ha anche realizzato un web-comic, Very Bad Koalas.
Mentre la sua carriera continua a crescere, la sua vita privata ha subito una battuta di arresto nel 2007 con il divorzio dall'attrice Tressa DiFiglia. Le cose non sono andate meglio di recente: Nicholas, infatti, nel 2010 è stato arrestato per un episodio di vandalismo e per aver opposto resistenza a un poliziotto.
2000 Candidatura Miglior attore non protagonista in una serie TV per Buffy - L'ammazzavampiri
1999 Candidatura Miglior attore televisivo di genere per Buffy - L'ammazzavampiri
1998 Candidatura Miglior attore televisivo di genere per Buffy - L'ammazzavampiri
2006 Recitazione
2004 Recitazione
2009 Recitazione
2007 Recitazione
La manager di Nicholas Brendon ha recentemente parlato della paralisi genitale che ha colpito la star di Buffy l'ammazzavampiri.
Secondo quanto riportato da TMZ, Nicholas Brendon di Buffy - L'ammazzavampiri è stato arrestato per possesso di droghe.
Nicholas Brendon, che nella serie Buffy aveva interpretato Xander, rischia di essere condannato a 4 anni di carcere.
Buffy - L'ammazzavampiri è una delle serie più amate di sempre e i fan hanno potuto assistere a una reunion del cast che si è svolta a Portland, ecco le foto e i video condivisi online.
A Lucca Comics & Games la star di Buffy Nicholas Brendon ci ha parlato del successo della serie, dei suoi demoni personali e del reboot, ecco cosa ne pensa.