Rhona Mitra nasce nel quartiere londinese di Paddington, il 9 agosto 1976. Suo padre, Anthony, è di origine anglo-indiane mentre sua madre, Nora, è irlandese. A soli otto anni, a causa del divorzio dei genitori, viene messa in collegio e durante l'adolescenza mostra un carattere ribelle, facendosi espellere dalla scuola femminile Roedean.
La sua passione per la recitazione si sviluppa presto, frequentando i teatri locali.
Nel 1994 presta la sua immagine ai disegnatori di Lara Croft, l'eroina del noto video game Tomb Raider. La sua prima performance da attrice è, tre anni dopo, nella serie TV Ghostbusters of East Finchley, a cui seguiranno The Bill e The Man Who Made Husbands Jealous.
Nel 1998 debutta sul grande schermo con Il fantastico mondo di Aladino di Robert L. Levy e, nello stesso anno, recita anche in Croupier di Mike Hodges e in Monk Dawson di Tom Walzer.
Accanto a Christopher Lambert è poi nel Beowulf (1999) di Graham Baker.
La sua carriera continua tra il cinema, con i film L'uomo senza ombra (2000) di Paul Verhoeven e La vendetta di Carter (2002) di Mike Hodges, e la TV, con le serie Party of Five (2000) e Gideon's Crossing (2001).
Nel 2003 la vediamo a fianco di Kevin Spacey e Kate Winslet in The life of David Gale di Alan Parker e poi nel film TV Spartacus, diretto da Robert Dornhelm. La sua notorietà, soprattutto per il pubblico inglese e statunitense, arriva però con la serie TV The Practice (2004), a cui segue Boston Legal (2005).
Recita inoltre in Skinwalkers - La notte della luna rossa (2006) di James Isaac e in Number 23 (2007) di Joel Schumacher e nel recente Doomsday - Il giorno del giudizio, per la regia di Neil Marshall.
I suoi prossimi impegni sono già in post-produzione: il thriller The Boy in the Box di Anders Anderson e il fantasy-horror Underworld: Rise of the Lycans di Patrick Tatopoulos.
2012 Recitazione
2009 Recitazione
2008 Recitazione
2004 Recitazione
Volto noto in tv, Rhona Mitra sarà la malvagia Mercy Graves nella quarta stagione di Supergirl.
Ritorna su TNT la serie action ispirata al romanzo di William Brinkley e con protagonisti Eric Dane, Rhona Mitra e Adam Baldwin: ecco il nostro commento ai primi due episodi della seconda stagione di The Last Ship, con uno scontro all'ultimo sangue nella città di Baltimora.
Secondo voci non confermate, l'attrice inglese sarebbe tra quelle considerate per il ruolo della donna gatto nel prossimo episodio di Batman.
L'attrice sarà tra i protagonisti del prossimo film di Neil Marshall.